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日本同仁CK04 cck-8試劑盒的簡(jiǎn)介
更新時(shí)間:2023-03-14   點(diǎn)擊次數(shù):810次

日本同仁CK04 cck-8試劑盒

日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產(chǎn)品簡(jiǎn)介:

產(chǎn)品品牌:同仁

產(chǎn)品名稱:cck-8試劑盒

英文名稱:Cell Counting Kit-8

產(chǎn)品貨號(hào):CK04

產(chǎn)品規(guī)格:500t

日本同仁CK04 cck-8試劑盒,產(chǎn)品說(shuō)明:

Cell Counting Kit-8 簡(jiǎn)稱CCK-8試劑盒,為MTT法的替代方法,是一種基于WST(水溶性四唑鹽,化學(xué)名:2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑單鈉鹽)的廣泛應(yīng)用于細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速高靈敏度檢測(cè)試劑盒??捎糜谒幬锖Y選、細(xì)胞增殖測(cè)定、細(xì)胞毒性測(cè)定、腫瘤藥敏等試驗(yàn)
使用說(shuō)明:
一、制作標(biāo)準(zhǔn)曲線(測(cè)定細(xì)胞具體數(shù)量時(shí))

1

、先用細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)所制備的細(xì)胞懸液中的細(xì)胞數(shù)量,然后接種細(xì)胞。

2

、按比例依次用培養(yǎng)基等比稀釋成一個(gè)細(xì)胞濃度梯度,一般要做3-5個(gè)細(xì)胞濃度梯度,每組3-6個(gè)復(fù)孔。

3

、接種后培養(yǎng)至細(xì)胞貼壁,然后加CCK-8試劑培養(yǎng)一定時(shí)間后測(cè)定OD 值,制作出一條以細(xì)胞數(shù)量為橫坐標(biāo)(X 軸),OD 值為縱坐標(biāo)(Y 軸)的標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)此標(biāo)準(zhǔn)曲線可以測(cè)定出未知樣品的細(xì)胞數(shù)量(試用此標(biāo)準(zhǔn)曲線的前提是實(shí)驗(yàn)的條件要一致,便于確定細(xì)胞的接種數(shù)量以及加入CCK-8后的培養(yǎng)時(shí)間。)
二、細(xì)胞活性檢測(cè)

1

、在96孔板中接種細(xì)胞懸液(100μL/孔)。將培養(yǎng)板放在培養(yǎng)箱中預(yù)培養(yǎng)(在37,5% CO2的條件下)。

2

、向每孔加入10μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。

3

、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

4

、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450nm處的吸光度。

5

、如果暫時(shí)不測(cè)定OD值,打算以后測(cè)定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。
三、細(xì)胞增值-毒性檢測(cè)

1

、在96孔板中配置100 μL 的細(xì)胞懸液。將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱預(yù)培養(yǎng)24小時(shí)(在37 ℃,5% CO2的條件下)。

2

、向培養(yǎng)板加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。在培養(yǎng)箱孵育一段適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如:6、12、2448小時(shí))。

3

、向每孔加入10 μL CCK-8溶液(注意不要在孔中生成氣泡,它們會(huì)影響OD值的讀數(shù))。如果待測(cè)物質(zhì)有氧化性或還原性的話,可在加CCK-8之前更換新鮮培養(yǎng)基(除去培養(yǎng)基,并用培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞兩次,然后加入新的培養(yǎng)基),去掉藥物影響。

4

、將培養(yǎng)板在培養(yǎng)箱內(nèi)孵育1-4小時(shí)。

5

、用酶標(biāo)儀測(cè)定在450 nm處的吸光度。

6

、如果暫時(shí)不測(cè)定OD 值,打算以后測(cè)定的話,可以向每孔中加入10μL 0.1MHCl或者1%SDS(W/V)溶液,并遮蓋培養(yǎng)板避光保存在室溫條件下。在24小時(shí)內(nèi)吸光度不會(huì)發(fā)生變化。



活力計(jì)算:.
細(xì)胞活力(%)=[A(加藥)A(空白)][ A(0加藥)A(空白)]×100

A

(加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液和藥物溶液的孔的吸光度

A

(空白):具有培養(yǎng)基和CCK-8溶液而沒(méi)有細(xì)胞的孔的吸光度

A

0 加藥):具有細(xì)胞、CCK-8溶液而沒(méi)有藥物溶液的孔的吸光度
細(xì)胞活力:細(xì)胞增殖活力或細(xì)胞毒性活力
注意事項(xiàng):
①建議先做幾個(gè)孔摸索接種細(xì)胞的數(shù)量和加入CCK-8試劑后的培養(yǎng)時(shí)間。
②白細(xì)胞可能需要培養(yǎng)較長(zhǎng)時(shí)間。
③當(dāng)使用標(biāo)準(zhǔn)96 孔板時(shí),貼壁細(xì)胞的最小接種量至少為1 ,000個(gè)/ (100 μL培養(yǎng)基)。檢測(cè)白細(xì)胞時(shí)的靈敏度相對(duì)較低,因此推薦接種量不低于2,500 個(gè)/ ( 100 μL培養(yǎng)基)。如果要使用24孔板或6孔板實(shí)驗(yàn),請(qǐng)先計(jì)算每孔相應(yīng)的接種量,并按照每孔培養(yǎng)基總體積的10% 加入CCK-8溶液。
④如果沒(méi)有450nm的濾光片,可以使用吸光度在430-490 nm 之間的濾光片,但是450nm檢測(cè)靈敏度最高。
⑤培養(yǎng)基中酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí),通過(guò)扣除空白孔中本底的吸光度而消去,因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。


CCK-8

法與其它檢測(cè)方法之間的比較:
細(xì)胞計(jì)數(shù)方法 MTT XTT WST-1 CCK-8
形成的formazan 的水溶性 差 好 好 好
產(chǎn)品性狀 粉末 2 瓶溶液 溶液 1瓶溶液
使用方法 配成溶液后使用 現(xiàn)配現(xiàn)用 無(wú)需預(yù)制 無(wú)需預(yù)制
檢測(cè)靈敏度 高 很高 很高 高
檢測(cè)時(shí)間 較長(zhǎng) 較短 較短 最短
檢測(cè)波長(zhǎng) 560-600nm 420-480nm 420-480nm 430-490nm
細(xì)胞毒性 高,細(xì)胞形態(tài)wanquan消失 很低,細(xì)胞形態(tài)不變 很低,細(xì)胞形態(tài)不變 很低,細(xì)胞形態(tài)不變
試劑穩(wěn)定性 一般 較差 一般 很好
大批量樣品檢測(cè) 可以 非常適合 非常適合 非常適合
便捷程度 一般 便捷 便捷 非常便捷







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